Simultaneous Determination of 11 Flavonoid Aglycones in Pueraria Lobata by Solid Phase Extraction-Liquid Chromatography-Tandem Mass Spectrometry
摘 要
建立了固相萃取-液相色谱-串联质谱法(LC-MS/MS)同时测定葛根中葛根素、甘草素、大豆素、野黄芩素、大豆黄素、槲皮素、鸢尾黄素、染料木素、山萘酚、黄芩素和刺芒柄花素11种黄酮苷元含量的方法。在0.10 g葛根样品中加入0.5 g叔丁基对苯二酚,36 mL 50%(体积分数)乙醇溶液和4 mL盐酸,在氮气保护下水解120 min,提取其中的11种黄酮苷元。采用Waters HLB固相萃取柱,以20%(体积分数)甲醇溶液为淋洗液,以甲醇为洗脱液对样品进行净化。以Mightysil RP-18色谱柱为固定相,以甲醇-水体系(大豆苷、大豆黄苷、刺芒柄花苷)或甲醇-0.15%(体积分数,下同)甲酸溶液体系(其他8种黄酮苷和11种黄酮苷元)为流动相进行梯度洗脱,采用LC-MS/MS测定其中11种黄酮苷元的含量。用体积比为4∶6的甲醇-0.15%甲酸溶液的混合液配制的混合标准溶液系列绘制标准曲线,外标法定量。结果显示:11种黄酮苷元的质量分数在0.05%~2.50%内与其对应的峰面积呈线性关系,葛根素、大豆素和黄芩素的检出限(3S/N)均为0.04%,甘草素、野黄芩素、大豆黄素、槲皮素、鸢尾黄素、染料木素、山萘酚和刺芒柄花素的检出限均为0.02%;对实际样品进行3个浓度水平的加标回收试验,11种黄酮苷元的回收率为75.0%~94.0%,测定值的相对标准偏差(RSD,n=6)为3.5%~12%;方法用于实际葛根样品的测定,葛根素、大豆素、大豆黄素、染料木素和刺芒柄花素均被不同程度地检出。
Abstract
A method for simultaneous determination of 11 flavonoid aglycones (puerarin, liquiritigenin, daidzein, scutellarein, glycitein, quercetin, tectorigenin, genistein, kaempferol, baicalein and formononetin) in Pueraria lobata by liquid chromatography-tandem mass spectrometry (LC-MS/MS) with solid phase extraction was developed. Pueraria lobata sample of 0.10 g were hydrolyzed with 0.5 g of tert-butylhydroquinone, 36 mL of 50% (φ) ethanol solution and 4 mL of hydrochloric acid for 120 min under the protection of nitrogen to extract 11 flavonoid aglycones. The sample solution was purified by Waters HLB solid phase extraction column with 20% (φ) methanol solution as leacheate and methanol as eluent. Mightysil RP-18 chromatographic column was used as the stationary phase, and the methanol-water system (daidzein, daidzein and formononein) or methanol-0.15% (φ, the below same) formic acid solution system (other 8 flavonoid glycosides and 11 flavonoid aglycones) was used as the mobile phase for gradient elution. 11 flavonoid aglycones were determined by LC-MS/MS. The mixed standard solution series prepared with a mixture of methanol and 0.15% formic acid solution at volume ratio of 4∶6 were used to draw the standard curves, and external standard method was used for quantitative analysis. As shown by the results, linear relationships between values of mass fraction of 11 flavonoid aglycones and their peak area were kept in the range of 0.05%-2.50%, with detection limits (3S/N) of 0.04% for puerarin, daidzein and baicalein, and 0.02% for liquiritigenin, scutellarein, glycitein, quercetin, tectorigenin, genistein, kaempferol and formononetin. Recovery test was made on actual samples at 3 concentration levels by stardand addition method, giving results in the range of 75.0%-94.0%, with RSDs (n=6) of the determined values in the range of 3.5%-12%. This method was applied to Pueraria lobata sample, and puerarin, daidzein, glycitein, genistein and formononetin were detected in varying degrees.
中图分类号 O657.63 DOI 10.11973/lhjy-hx202110001
所属栏目 试验与研究
基金项目 国家重点研发计划(2017YFF0211000)
收稿日期 2020/6/24
修改稿日期
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备注侯建波,高级工程师,主要从事食品质量安全检测研究,xmuhjb@163.com
引用该论文: HOU Jianbo,XIE Wen,SHI Yingzhu,LI Jie,WANG Peng,MAO Renyi,ZHANG Wenhua. Simultaneous Determination of 11 Flavonoid Aglycones in Pueraria Lobata by Solid Phase Extraction-Liquid Chromatography-Tandem Mass Spectrometry[J]. Physical Testing and Chemical Analysis part B:Chemical Analysis, 2021, 57(10): 865~872
侯建波,谢文,史颖珠,李杰,汪鹏,毛壬熠,张文华. 固相萃取-液相色谱-串联质谱法同时测定葛根中11种黄酮苷元的含量[J]. 理化检验-化学分册, 2021, 57(10): 865~872
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参考文献
【1】刘向前, 秦松云.药食同源植物资源[M].北京:中医古籍出版社, 2012:164-167.
【2】周国海, 于华忠, 李国章, 等.葛根中总黄酮及葛根素的含量测定[J].湖南农林科技, 2004, 31(5):71-72.
【3】刘杏荣, 董英, 孙艳辉, 等.葛根总黄酮的提取与UV-TLC测定研究[J].食品研究与开发, 2006, 27(10):126-129.
【4】陈志民, 黄阳, 郭莹莹, 等.葛根总黄酮的提取精制及含量测定方法研究[J].中国药业, 2014, 23(3):22-24.
【5】刘亚妮, 苏玉永, 马林, 等.高效液相色谱法同时测定葛根提取物中5种异黄酮的含量[J].中国医院药学杂志, 2012, 32(5):344-346.
【6】戴玲, 叶惠煊, 邹亲朋, 等.湘葛一号根HPLC指纹图谱及5种异黄酮含量的同时测定[J].西北药学杂志, 2016, 31(3):239-244.
【7】王治平, 李卫民, 高英, 等.HPLC同时测定不同产地葛根中6种主要异黄酮类成分的含量[J].中国实验方剂学杂志, 2013, 19(8):125-128.
【8】江和源, 吕飞杰, 台建祥, 等.测定大豆和葛根中异黄酮的高效液相色谱法[J].分析测试学报, 2000, 19(6):28-33.
【9】方从兵, 宛晓春, 江昌俊, 等.葛根药用成分异黄酮的HPLC指纹图谱分析[J].热带作物学报, 2005, 26(2):39-44.
【10】姜兰芳, 周光明, 李艳艳.胶束萃取-高效液相色谱法同时测定葛根粉中5种异黄酮[J].食品科学, 2011, 32(6):186-190.
【11】陈瑁, 宋敏, 张钰, 等.粉葛与野葛中异黄酮的HPLC指纹对照和比色测定[J].中国新药杂志, 2008, 17(14):1240-1246.
【12】李晓明, 杨滨, 黄璐琦.高效液相色谱-质谱联用分析鉴别葛根的异黄酮成分[J].中国中药杂志, 2008, 33(11):1337-1339.
【13】王金凤, 魏颖, 王芳, 等.超高效液相色谱串联质谱法检测葛花中异黄酮[J].中成药, 2014, 36(10):2125-2127.
【14】周永刚, 吴思, 毛飞, 等.葛根中黄酮类化学成分的UHPLC-Q-TOFMS分析[J].药学实践杂志, 2013, 31(2):116-119.
【15】孙冬梅, 董玉娟, 胥爱丽, 等.葛根枳棋软胶囊中黄酮类化合物的UPLC/Q-TOF-MS快速分析[J].中草药, 2015, 46(7):970-976.
【16】戴雨霖, 于珊珊, 张颖, 等.葛花中异黄酮类化学成分的RRLC-Q-TOF MS/MS研究[J].高等学校化学学报, 2014, 35(7):1396-1402.
【17】胡云霞, 樊金玲, 武涛.黄酮类化合物分类和生物活性机理[J].枣庄学院学报, 2014, 31(2):72-78.
【2】周国海, 于华忠, 李国章, 等.葛根中总黄酮及葛根素的含量测定[J].湖南农林科技, 2004, 31(5):71-72.
【3】刘杏荣, 董英, 孙艳辉, 等.葛根总黄酮的提取与UV-TLC测定研究[J].食品研究与开发, 2006, 27(10):126-129.
【4】陈志民, 黄阳, 郭莹莹, 等.葛根总黄酮的提取精制及含量测定方法研究[J].中国药业, 2014, 23(3):22-24.
【5】刘亚妮, 苏玉永, 马林, 等.高效液相色谱法同时测定葛根提取物中5种异黄酮的含量[J].中国医院药学杂志, 2012, 32(5):344-346.
【6】戴玲, 叶惠煊, 邹亲朋, 等.湘葛一号根HPLC指纹图谱及5种异黄酮含量的同时测定[J].西北药学杂志, 2016, 31(3):239-244.
【7】王治平, 李卫民, 高英, 等.HPLC同时测定不同产地葛根中6种主要异黄酮类成分的含量[J].中国实验方剂学杂志, 2013, 19(8):125-128.
【8】江和源, 吕飞杰, 台建祥, 等.测定大豆和葛根中异黄酮的高效液相色谱法[J].分析测试学报, 2000, 19(6):28-33.
【9】方从兵, 宛晓春, 江昌俊, 等.葛根药用成分异黄酮的HPLC指纹图谱分析[J].热带作物学报, 2005, 26(2):39-44.
【10】姜兰芳, 周光明, 李艳艳.胶束萃取-高效液相色谱法同时测定葛根粉中5种异黄酮[J].食品科学, 2011, 32(6):186-190.
【11】陈瑁, 宋敏, 张钰, 等.粉葛与野葛中异黄酮的HPLC指纹对照和比色测定[J].中国新药杂志, 2008, 17(14):1240-1246.
【12】李晓明, 杨滨, 黄璐琦.高效液相色谱-质谱联用分析鉴别葛根的异黄酮成分[J].中国中药杂志, 2008, 33(11):1337-1339.
【13】王金凤, 魏颖, 王芳, 等.超高效液相色谱串联质谱法检测葛花中异黄酮[J].中成药, 2014, 36(10):2125-2127.
【14】周永刚, 吴思, 毛飞, 等.葛根中黄酮类化学成分的UHPLC-Q-TOFMS分析[J].药学实践杂志, 2013, 31(2):116-119.
【15】孙冬梅, 董玉娟, 胥爱丽, 等.葛根枳棋软胶囊中黄酮类化合物的UPLC/Q-TOF-MS快速分析[J].中草药, 2015, 46(7):970-976.
【16】戴雨霖, 于珊珊, 张颖, 等.葛花中异黄酮类化学成分的RRLC-Q-TOF MS/MS研究[J].高等学校化学学报, 2014, 35(7):1396-1402.
【17】胡云霞, 樊金玲, 武涛.黄酮类化合物分类和生物活性机理[J].枣庄学院学报, 2014, 31(2):72-78.
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