作者如此感叹到：有幸见证了生物色谱法的兴起，这实在是令人感到兴奋！
 
早在2009年本文作者就提到过生物色谱法在未来必定会兴起。[1] 六年过去了，作者说他很高兴自己当年对于生物色谱法的许多预言都已经成真。

在过去的许多年中，大分子分析是唯一的研究热点，人们都未对“小分子”的世界产生如今这样的热情和激烈的讨论，而现在是对全世界的“小分子”工作者的一种激励。未来的色谱不可阻挡会变成一种工业化的新兴色谱，你仅仅需要按一下按钮，结果就会从色谱的数据系统中输出，然后你就可以发邮件给你的同事告诉他们“需要做些什么”了。

如今，对于那些多年来一直从事蛋白质和多肽分析的研究人员以及色谱供应商，大家都看到了这条新的道路——生物色谱法，很明显大家都为此感到高兴！但与此同时，这些小分子工作者的脸上也写满了困惑——接下来更要学习如何分析产品，这将决定一个公司未来的命运。没有压力，然后……

很明显，对于多肽和蛋白质的分析，经常需要用到几种不同的色谱模式，最终根据汇总所有的数据才能对生物实体进行定性和定量。反相高效液相色谱法(RHPLC)是用于分析小型的完整的分析物的常用方法(使用反相固定相)，也是用于分析消化类较大的蛋白质的常用方法；因为在这些分析过程中都需要做到高效分离，并且要使用柱长较长、内径较窄、填充粒子更小的色谱柱，来获得最高的色谱峰值，以提高在质谱检测过程中蛋白质序列的覆盖率和鉴别的准确性。

科学家们也用凝胶排阻色谱法(SEC)(也称为凝胶过滤色谱法(GFC))来分离蛋白质和肽分子，该方法是根据分子尺寸的大小和流体力学平衡达到分离的方法，这对于表达蛋白质组成片段或聚集形态是一种更安全、有效的方法。也有使用亲水作用色谱法(HILIC)配荧光或(高分辨率)的质谱检测器来分析降解和标记的多糖的结构；使用疏水作用色谱(HIC)来分析蛋白质(非变性状态)和蛋白质的纯化。而通常用于监控生产过程的亲和色谱法，则是利用抗体类配体捕获蛋白质，然后洗脱下来通过滴定或化验等方法进行定量。

那么对于小分子工作者，他们最近使用什么技术进行分析呢？作者对色谱分析的未来进行了展望(包括小分子和大分子)：

* 生物色谱法成为了一种人们感兴趣的新兴的色谱法，它基于离子色谱法，结合pH梯度洗脱(与盐梯度洗脱截然不同，较之盐梯度洗脱明显更快) 来分析带电荷的分析物。这些蛋白质和肽分子携带不同数量的基本电荷，最终由于蛋白质翻译后修饰、序列、糖组成的不同等呈现出分离结果的差异。该法大大地提高了测定带电荷变体的分析速度、效率和稳定性。
 
* 通过缩小离子交换分离柱的直径，可以提高“通量”。配合各种检测器（如散射微分粘度、紫外检测器等)和SEC，可以提供大量的关于分子大小、流体力学体积、构象的相对和绝对的信息。
 
* 疏水作用色谱法，作为一种可以分析完整的蛋白质分子的色谱法，是“温和的”而又不失强大的技术，这种方法可以非常迅速和高效地表征那些具有细微极性差异的分子(包括“小”分子)。
HILIC法常用于蛋白质(变体)分析方法的开发。 

* 精确的傅里叶变换质谱技术可用于完整的蛋白质分子的分析，对它们进行物种分类、量化（即使是非常低的水平）。

* 几家供应商已经发布、或者很快就会发布一些新颖的蛋白质和多糖分析的工作流程，这将大大地降低分析时间，并且使用质谱检测器分析蛋白质分子的降解、标记成为可能。

相信在这个各学科快速发展、并相互影响的时代，生物色谱技术必将不断发展，以更加方便、高效、快捷的方式应用于科研和生产领域。

参考文献：
[1] Incognito, The Column 5(2) 12–14 (2009).
 
作者：匿名
《The Column》第11卷，第10期
译自：chromatographyonline
来源：材料与测试
译者：兔子小光

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